NKp30 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403117-ACT

NCR3は、ナチュラルキラー（NK）細胞および自然免疫様T細胞の一部サブセットに発現する活性化受容体NKp30をコードしており、標的細胞上のストレス誘導性リガンドを認識することで免疫監視に寄与します。NKp30が結合すると、会合するアダプター分子を介したITAM依存性シグナル伝達が誘導され、SYK/ZAP70の活性化、カルシウムフラックス、MAPKシグナル、細胞傷害性顆粒のエキソサイトーシス、サイトカイン産生などの下流経路が促進されます。NCR3/NKp30の発現量や機能の変化は、腫瘍微小環境やウイルス感染時におけるNK細胞応答性の違いと関連していることが示されており、免疫回避や炎症の文脈で頻繁に研究されています。自然免疫エフェクターの活性化において中心的な表面受容体であるNKp30は、ヒト免疫細胞におけるシグナル伝達の閾値や受容体—リガンド生物学を解析するための扱いやすい標的（ノード）となります。

NKp30 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NKp30 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NKp30の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNKp30依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNKp30経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。