NIS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402298-ACT

SLC5A5はナトリウム／ヨウ化物共輸送体（NIS）をコードしており、NISは細胞膜上のトランスポーターとして、ナトリウムの電気化学勾配に共役してヨウ化物を取り込み、細胞内にヨウ化物を濃縮します。NIS活性は、ヨウ化物依存的な生合成プロセスを支えるとともに、細胞のレドックスバランスにも影響します。またその制御は、分化状態や、膜トランスポーター発現を司る転写制御プログラムと結び付いています。SLC5A5の発現変化や局在異常は、甲状腺に限らず非甲状腺の状況でも報告されており、ヨウ化物の取り扱いの破綻は、系統（リネージ）アイデンティティやトランスポーター輸送（トラフィッキング）の状態を反映する機能的指標となり得ます。これらの特性により、NISは溶質キャリア（SLC）生物学、膜タンパク質の成熟過程、ならびに上皮の専門化を制御する転写機構を研究するうえで有用なモデルとなっています。

NIS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC5A5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NIS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC5A5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC5A5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NISの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC5A5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNIS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC5A5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNIS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。