CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
Nir2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-422251-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Nir2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Nir2ダブルニカースプラスミド（m）およびNir2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Pitpnm1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Nir2 抗体 (8): sc-136140
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Nir2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422251-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nir2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422251-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pitpnm1 は、ホスファチジルイノシトール転移タンパク質である Nir2 をコードしており、膜間で脂質を交換することでホスホイノシチド恒常性を維持し、形質膜におけるホスファチジルイノシトール 4,5-二リン酸（PI(4,5)P2）プールを保つ役割を担います。マウス細胞では、Nir2 は受容体依存的なホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達を、小胞体―形質膜接触部位における脂質補充と結び付け、カルシウム依存性シグナル伝達、膜輸送、ならびに細胞骨格ダイナミクスに影響を与えます。ホスホイノシチドのターンオーバー調節に関与することで、Nir2 は脂質シグナルのフラックスに感受性のある細胞遊走、神経突起伸長、ベシクル輸送といった過程にも寄与します。ホスホイノシチド代謝や膜接触部位機能の破綻は、神経生物学、代謝、増殖シグナルの研究に広く関連し、疾患志向の研究モデルに対する機構的な切り口を提供します。
Nir2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Pitpnm1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Pitpnm1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Pitpnm1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Pitpnm1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。