Ninjurin-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408142-ACT

NINJ2は、接触依存性シグナル伝達、膜動態、ならびに細胞移動の調節に関与するとされる細胞表面接着タンパク質Ninjurin-2をコードします。Ninjurinファミリーのメンバーは、組織損傷や炎症性刺激への応答と関連しており、白血球のトラフィッキング、神経突起伸長、グリア—ニューロン間相互作用における役割が示唆されています。ヒト遺伝学および機能解析研究では、NINJ2は神経血管性および神経炎症性の表現型と関連づけられており、NINJ2発現の変化が細胞ストレス応答や細胞間コミュニケーションにどのような影響を及ぼすかを検討する動機となっています。これらの特性により、Ninjurin-2は接着、免疫シグナル、神経系の恒常性を制御する経路に関連する分子として位置づけられます。

Ninjurin-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NINJ2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ninjurin-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NINJ2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNINJ2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ninjurin-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNINJ2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNinjurin-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNINJ2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNinjurin-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。