NIK Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-424749-LAC-2

O gene murino Map3k14 codifica a quinase indutora de NF-κB (NIK), uma MAP3K que atua como ativador central da via não canônica de NF-κB ao promover o processamento de NF-κB2 p100 em p52 dependente de IKKα, a jusante de receptores como BAFFR, CD40, LTβR e RANK. A sinalização por NIK regula a organogênese linfoide, a maturação e a sobrevivência de células B, a diferenciação de osteoclastos e programas transcricionais inflamatórios por meio da coordenação da atividade das redes de MAPK e NF-κB. A desregulação da atividade de Map3k14/NIK está associada a uma homeostase imune aberrante e à inflamação crônica, com relevância para fenótipos autoimunes e para a patobiologia mediada por células B em modelos experimentais. A edição gênica de Map3k14 em camundongos permite estudos mecanísticos da sinalização proximal aos receptores, do controle transcricional e das contribuições específicas de cada tipo celular da sinalização não canônica de NF-κB em pesquisas de imunologia e inflamação.

As Partículas de Ativação Lentivirais NIK (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Map3k14 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NIK (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Map3k14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NIK. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Map3k14 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.