Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Double Nickaseプラスミド (h): sc-404001-NIC

CHRND は、筋型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）を構成するデルタサブユニットをコードする遺伝子であり、この受容体は五量体のリガンド作動性カチオンチャネルとして神経筋接合部のシナプス後膜に高濃度に局在します。アセチルコリンが結合すると受容体が開口し、Na⁺およびK⁺のイオン流入・流出を許容して終板の脱分極を引き起こし、シナプス伝達を骨格筋収縮へと結び付けます。CHRND の機能は、agrin–LRP4–MuSK シグナル伝達、受容体のクラスター形成、ならびに rapsyn と関連足場タンパク質による安定化など、シナプスの組み立てと成熟を制御する経路と統合されています。CHRND を含む筋型 nAChR サブユニットの遺伝学的な異常は、先天性筋無力症候群などの神経筋伝達障害と関連しており、本遺伝子はシナプス興奮性や受容体生合成の機序研究において重要です。

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRND 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRND内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNDの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNDが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。