Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401605-NIC

CHRNA4 codifica a subunidade α4 dos receptores nicotínicos neuronais de acetilcolina (nAChRs), que se montam como canais catiônicos pentaméricos ativados por ligante, geralmente em conjunto com subunidades β2 para formar receptores α4β2 de alta afinidade. Após a ligação de acetilcolina ou nicotina, esses receptores mediam o influxo de Na⁺ e Ca²⁺, regulando a excitabilidade da membrana, a transmissão sináptica e a plasticidade dependente de atividade em circuitos colinérgicos. A sinalização dependente de CHRNA4 interage com vias dependentes de cálcio e com programas de liberação de neurotransmissores que moldam a atenção, o estado de alerta e a função de redes neuronais relacionadas à recompensa. Perturbações genéticas e funcionais em CHRNA4 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da sinalização colinérgica e da biologia de receptores.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 4/CHRNA4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRNA4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRNA4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRNA4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRNA4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.