Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401880-NIC

CHRNA1は、筋型ニコチン性アセチルコリン受容体のα1サブユニットをコードしており、神経筋接合部における高速なシナプス伝達に必須のリガンド作動性カチオンチャネルです。アセチルコリンが結合すると受容体が開口し、Na⁺の流入と膜脱分極が生じます。これが下流の電位依存性チャネルの活性化やCa²⁺シグナル伝達を介して興奮―収縮連関の過程へと結びつきます。CHRNA1の機能は、agrin–LRP4–MuSKシグナル伝達およびrapsyn依存的な集合機構に関わる、シナプス後膜での受容体クラスター形成・安定化経路と統合されています。この受容体複合体の遺伝学的または機能的な攪乱は、先天性筋無力症候群や関連する神経筋伝達障害に関与するとされており、CHRNA1はシナプス生理および受容体生合成の機序研究における重要な標的です。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 1/CHRNA1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。