NHE-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400748-ACT

SLC9A1はヒトのNa⁺/H⁺交換輸送体1（NHE-1）をコードしており、細胞膜に存在するアンチポーターとして、細胞外のNa⁺と引き換えに細胞内のH⁺を排出することで、細胞質pHの維持、細胞容積の調節、ならびにイオン恒常性の維持に寄与します。NHE-1の活性は、増殖因子シグナル伝達や細胞骨格リモデリングと連動して、増殖、遊走、ストレス適応に影響を与え、さらにpH依存的な代謝や酵素活性の制御にも関与します。NHE-1機能やpH恒常性の破綻は、がん生物学における細胞生存・運動性プログラムの変化や、心血管・神経領域の研究で扱われる虚血関連障害の機序と関連づけられています。NHE-1はイオン輸送をシグナル出力に結び付けるため、SLC9A1はMAPK/ERK、Rho GTPase群、低酸素や酸化ストレスに対する細胞応答に関わる経路で頻繁に研究されています。

NHE-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC9A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NHE-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC9A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC9A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NHE-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC9A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNHE-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC9A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNHE-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。