NGFR p75 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400552-ACT

NGFR（p75NTR）は、低親和性ニューロトロフィン受容体であるNGFR p75をコードしており、NGFやその他のニューロトロフィンに結合するTNF受容体スーパーファミリーの一員です。NGFR p75は、状況依存的に神経細胞の生存、分化、アポトーシスを調節します。さらにNGFR p75は、Trk受容体やソルチリンと協調してリガンド特異性に影響を与えるとともに、NF-κB、JNK/c-Jun、RhoA、セラミド依存性経路を介した下流シグナル伝達を制御し、軸索伸長、シナプス再構築、ストレス応答を形成します。ヒト組織では、NGFRの発現は神経堤由来系譜や損傷に対する動的応答の指標となっており、p75NTRシグナルの異常は、神経変性、神経障害性疼痛の機序、ならびに複数のがんにおける腫瘍細胞の可塑性と関連づけられています。これらの特性により、NGFRはニューロトロフィン経路のクロストーク、細胞運命転換、そしてアポトーシスと生存のシグナル閾値を解析するための有用な分子ツールとなります。

NGFR p75 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NGFRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NGFR p75 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NGFR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNGFR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NGFR p75の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNGFR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNGFR p75依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNGFR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNGFR p75経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。