NGAL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401838-ACT

LCN2は、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（NGAL）をコードしており、NGALはシデロフォア–鉄複合体に結合して鉄輸送を調節するとともに、抗菌防御や上皮ストレス応答を制御する分泌性リポカリンです。NGALは自然免疫シグナル伝達および炎症プログラムに関与し、NF-κBやサイトカイン駆動性経路とのクロストークを含め、組織損傷や細胞ストレスによってしばしば誘導されます。ヒト生物学においては、LCN2/NGAL発現の変化が、炎症制御の破綻、代謝リモデリング、腫瘍関連微小環境の変化と関連づけられており、免疫–上皮相互作用を研究するうえで有用なマーカーであると同時に、機序解明の要となる分子でもあります。さらに、細胞外マトリックス動態やプロテアーゼ関連プロセスにおける役割は、バリア機能障害やリモデリング表現型といった状況ともNGALを結び付けます。

NGAL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LCN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NGAL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LCN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLCN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NGALの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLCN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNGAL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLCN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNGAL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。