NF45 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402042-ACT

ILF2はNF45をコードしており、NF45は多機能なRNA／DNA結合タンパク質である。NF45はILF3（NF90/NF110）とヘテロ二量体を形成し、転写、pre-mRNAのプロセシング、mRNAの安定性、翻訳を調節する。NF45はRNAポリメラーゼIIに関連した遺伝子制御、ストレス応答性リボヌクレオタンパク質複合体、ならびに細胞増殖プログラムに関与し、サイトカインおよび抗ウイルス遺伝子発現の制御とも関連付けられている。これらの作用を通じて、ILF2/NF45は細胞周期の進行、ゲノム維持、炎症性シグナルへの応答に影響を及ぼす。ILF2発現やNF45を含む複合体の制御不全は、腫瘍性増殖、免疫シグナルの不均衡、ウイルス—宿主相互作用といった文脈で報告されており、遺伝子制御ネットワークの機構研究における有用な結節点となる。

NF45 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ILF2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NF45 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ILF2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はILF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NF45の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のILF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNF45依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびILF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNF45経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。