Plasmide CRISPR d'Activation (h) neuroligin 3: sc-404537-ACT

NLGN3 code la neuroligine 3, une molécule d’adhésion cellulaire postsynaptique qui organise le développement et la maturation des synapses via des interactions transsynaptiques avec les neurexines présynaptiques. La neuroligine 3 contribue à l’équilibre entre synapses excitatrices et inhibitrices en favorisant l’assemblage et la stabilisation de complexes protéiques synaptiques et de structures d’ancrage des récepteurs aux neurotransmetteurs, influençant ainsi la plasticité synaptique et l’activité des réseaux neuronaux. Des altérations de l’expression ou de la fonction de NLGN3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, en accord avec ses rôles dans la formation des circuits, la régulation des épines dendritiques et le remodelage des synapses dépendant de l’activité.

neuroligin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NLGN3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

neuroligin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NLGN3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NLGN3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de neuroligin 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NLGN3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de neuroligin 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie neuroligin 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de NLGN3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.