neuroligin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401668-ACT

Il gene umano **NLGN1** codifica la neuroligina 1, una proteina di adesione cellulare postsinaptica che si lega alle neurexine presinaptiche per organizzare la formazione, la maturazione e la stabilità delle sinapsi eccitatorie. La neuroligina 1 funge da impalcatura per complessi proteici sinaptici e contribuisce alla plasticità sinaptica dipendente dall’attività coordinando la localizzazione dei recettori e la segnalazione a valle che modella la connettività neuronale. Grazie al suo ruolo nella sinaptogenesi e nel perfezionamento dei circuiti, NLGN1 è frequentemente studiato nei pathway che regolano la trasmissione glutamatergica e il rimodellamento sinaptico. Alterazioni della segnalazione neuroligina–neurexina e la disregolazione di NLGN1 sono state investigate nel contesto dei meccanismi di malattie del neurosviluppo e neuropsichiatriche, inclusi fenotipi di disfunzione sinaptica.

neuroligin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NLGN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

neuroligin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NLGN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NLGN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di neuroligin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NLGN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da neuroligin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via neuroligin 1 nelle cellule tumorali con espressione di NLGN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.