neuroligin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401668-ACT

ヒトNLGN1はニューロリギン1（neuroligin 1）をコードしており、これはシナプス後部位の細胞接着タンパク質で、シナプス前部位のニューレキシン（neurexin）に結合して興奮性シナプスの形成、成熟、および安定化を組織化します。ニューロリギン1はシナプスタンパク質複合体の足場として機能し、受容体の局在化と、それに続く神経回路の結合性を形作る下流シグナル伝達を協調させることで、活動依存的なシナプス可塑性にも寄与します。シナプス形成や回路の洗練化における役割から、NLGN1はグルタミン酸作動性伝達およびシナプス再構築を制御する経路の研究で頻繁に取り上げられます。ニューロリギン—ニューレキシンのシグナル伝達の変調やNLGN1の発現制御異常は、シナプス機能障害の表現型を含む神経発達・神経精神疾患の病態機序との関連で検討されてきました。

neuroligin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NLGN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

neuroligin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NLGN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNLGN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性neuroligin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNLGN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるneuroligin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNLGN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるneuroligin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。