Neurofibromin 2/NF2/Merlin Double Nickaseプラスミド (m): sc-421862-NIC

マウスNf2は、神経線維腫症2型タンパク質（Merlin）をコードしており、細胞膜と細胞骨格をつなぐ足場タンパク質として、細胞—細胞接着部位からのシグナルを統合し、増殖を抑制して上皮構造を維持します。Merlinは、皮質アクチンをHippoシグナル伝達やその下流のYAP/TAZによる転写プログラムなどの増殖制御経路へ連結することで、接触阻害とメカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）を協調的に制御します。これらの相互作用を介して、NF2は受容体のトラフィッキングや細胞骨格ダイナミクスを調節し、遊走、極性、細胞周期制御に影響を与えます。NF2関連ネットワークの制御異常は、神経系および間葉系系譜における組織恒常性や腫瘍抑制機構の研究に幅広く関係します。

Neurofibromin 2/NF2/Merlin ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nf2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nf2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nf2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nf2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。