neurexin I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401872-ACT

ヒトNRXN1は、ニューレキシンIをコードしており、ニューロリギンやLRRTMなどのシナプス後部パートナーと相互作用することで、シナプスの仕様決定と成熟を協調的に制御するシナプス前部の細胞接着受容体である。ニューレキシンIは、神経伝達物質放出装置の構築を助け、カルシウム依存的なエキソサイトーシスに影響を与え、興奮性—抑制性回路のバランスに重要な活動依存的シナプス可塑性を支える。NRXN1の機能は、神経細胞間の接続性、軸索ガイダンス、皮質発生を形作るシナプスシグナル伝達ネットワークなどを司る経路と関連している。NRXN1の遺伝学的あるいは制御レベルでの破綻は、神経発達性および神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、シナプス機能不全の機序研究における重要な標的となっている。

neurexin I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NRXN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

neurexin I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NRXN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNRXN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性neurexin Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNRXN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるneurexin I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNRXN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるneurexin I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。