Neu2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408479-NIC

ヒトのNEU2は、細胞質型ニューロミニダーゼ2（Neu2）をコードしており、これは糖タンパク質および糖脂質の末端シアル酸を除去するシアリダーゼです。これにより、細胞内の糖鎖複合体（グリココンジュゲート）の組成とターンオーバーが調節されます。シアリル化状態を制御することで、NEU2は糖鎖依存的なシグナル伝達、膜動態、ならびに分化やストレス応答を制御する経路と交差する炭水化物代謝プロセスに影響を与えます。シアリダーゼ活性の変化や異常なシアリル化パターンは、細胞間相互作用の破綻や腫瘍性表現型と関連づけられており、糖鎖修飾のリモデリングが疾患関連の生物学にどのような影響を及ぼすかを研究するうえで、NEU2は有用な標的となります。NEU2の機能解析は、糖鎖プロセシング・ネットワークの機構研究と、それらが細胞恒常性に果たす役割の解明を後押しします。

Neu2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NEU2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NEU2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NEU2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NEU2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。