Neu1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401488-ACT

NEU1 codifica la neuraminidasi 1 umana (Neu1), una sialidasi lisosomiale che rimuove gli acidi sialici terminali da glicoproteine e glicolipidi, modellando il catabolismo lisosomiale e la composizione dei glicani sulla superficie cellulare. Neu1 agisce all’interno del complesso multienzimatico lisosomiale e contribuisce al turnover e al traffico dei substrati sialilati, influenzando la segnalazione dei recettori e le vie endocitiche attraverso la regolazione della desialilazione proteica. Un’attività alterata di NEU1 è associata a una compromissione dell’omeostasi lisosomiale e a pattern di glicosilazione anomali che incidono sulla segnalazione infiammatoria e sui processi di adesione cellulare. La disfunzione di NEU1 è correlata a fenotipi di malattie da accumulo lisosomiale, rendendo Neu1 un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi dipendenti dalla sialilazione nelle cellule umane.

Neu1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NEU1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neu1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NEU1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NEU1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neu1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NEU1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neu1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neu1 nelle cellule tumorali con espressione di NEU1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.