Plásmido Doble Nickase (h) NET-4: sc-404621-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)NET-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NET-4 (h) y el plásmido de doble nickasa NET-4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TSPAN5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) NET-4 | sc-404621-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) NET-4 | sc-404621-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSPAN5 codifica la tetraspanina-5 (NET-4), una proteína de membrana con cuatro pasos transmembrana que organiza microdominios enriquecidos en tetraspaninas para coordinar la agrupación de receptores, la comunicación célula–célula y el tráfico de membrana. NET-4 se ha implicado en la regulación de la adhesión y la migración celular a través de sus interacciones con proteínas asociadas en la membrana plasmática, influyendo en procesos de señalización vinculados a la remodelación del citoesqueleto y al transporte vesicular. En tejidos humanos, la expresión de TSPAN5 se ha asociado con el desarrollo neuronal y la organización sináptica, en consonancia con funciones más amplias de las tetraspaninas en la modulación de la dinámica de receptores y la señalización intercelular. Las redes de tetraspaninas desreguladas, incluidos cambios en microdominios relacionados con TSPAN5, se estudian en el contexto de programas de diferenciación alterados y estados de señalización relevantes para enfermedades.
NET-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TSPAN5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TSPAN5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TSPAN5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TSPAN5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.