Plásmido CRISPR de Activación (h) nestin: sc-400156-ACT

El gen humano **NES** codifica la nestina, una proteína de filamento intermedio de clase VI enriquecida en células madre/progenitoras neurales y otros precursores multipotentes, donde contribuye a la organización del citoesqueleto durante la proliferación rápida, la migración y el compromiso de linaje. La expresión de nestina está estrechamente vinculada a programas del desarrollo y a la remodelación sensible al estrés, e interactúa con redes de señalización como Notch, Wnt/β-catenina y vías de factores de crecimiento que regulan la pluripotencia y la diferenciación. En tejidos adultos, **NES** suele inducirse durante la lesión y la regeneración, lo que refleja funciones en la glía reactiva, la angiogénesis y la remodelación tisular. La expresión desregulada de nestina se utiliza con frecuencia como marcador de estados poco diferenciados y se ha asociado con la plasticidad e invasividad de células tumorales en múltiples contextos de cáncer.

nestin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NES sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

nestin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NES en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NES, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de nestin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NES y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de nestin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía nestin en células tumorales con expresión de NES silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.