NEDL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410607

Panoramica

HECW2 codifica NEDL2, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo HECT che regola il turnover proteico e la segnalazione attraverso la modifica ubiquitina-dipendente di substrati cellulari chiave. L’attività di NEDL2 contribuisce alla proteostasi e influenza vie collegate allo sviluppo neuronale, alla funzione sinaptica e a programmi trascrizionali responsivi allo stress, modulando la stabilità e la disponibilità di proteine regolatorie. L’alterazione o la disregolazione di HECW2 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi ed è studiata nel contesto di una segnalazione dell’ubiquitina aberrante, che può incidere sul controllo del ciclo cellulare, sulla differenziazione e sull’integrità del genoma. In quanto componente della via dell’ubiquitina, NEDL2 è rilevante per studi meccanicistici sul riconoscimento dei substrati, sulla specificità della rete E2/E3 e sugli effetti a valle sui nodi di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NEDL2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HECW2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HECW2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HECW2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NEDL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HECW2 per lo studio della segnalazione di NEDL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HECW2 critici per la funzione di NEDL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HECW2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NEDL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NEDL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HECW2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NEDL2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NEDL2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HECW2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HECW2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.