NEDD4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401748-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NEDD4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase NEDD4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase NEDD4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para NEDD4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NEDD4 Anticorpo (F-11): sc-518160
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NEDD4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEDD4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene humano **NEDD4** codifica uma ligase E3 de ubiquitina que catalisa a transferência de ubiquitina para substratos, regulando a renovação (turnover) de proteínas, o tráfego intracelular e a amplitude da sinalização. Por meio de seus domínios C2 e WW, a NEDD4 reconhece alvos que contêm o motivo PY e influencia vias como a sinalização PI3K–AKT, a endocitose e a homeostase de receptores de membrana. A ubiquitinação dependente de NEDD4 modula a polaridade epitelial e programas de migração celular, e tem sido associada à regulação de supressores tumorais e de receptores de fatores de crescimento em múltiplos contextos celulares. A atividade desregulada da NEDD4 e a seleção de seus substratos têm sido relacionadas a um redirecionamento de vias de sinalização associadas ao câncer e a alterações em processos imunológicos e neuronais, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos da regulação mediada por ubiquitina.
NEDD4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NEDD4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NEDD4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NEDD4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NEDD4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.