Nectin 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401994-ACT

NECTIN2 は、免疫グロブリン様の細胞接着分子であるネクチン2（Nectin-2、CD112）をコードしており、接着結合（アドヘレンスジャンクション）に集積して、同種（ホモフィリック）および異種（ヘテロフィリック）相互作用を介した Ca2+ 非依存的な細胞間接触を仲介する。ネクチン2はアファディン（afadin、AF6）と結合し、カドヘリン‐カテニン複合体と協調することで、接着結合の形成、上皮細胞の極性、ならびに組織の形成や細胞移動に伴う細胞骨格の再編成に影響を与える。さらにネクチン2は、DNAM-1（CD226）および TIGIT のリガンドとして免疫認識にも関与し、接着の生物学と、免疫シナプスにおける NK 細胞および T 細胞のシグナル伝達を結び付けている。NECTIN2 の発現異常は、接着状態の変化、免疫回避の表現型、複数の悪性腫瘍における進行関連の特徴と関連することが報告されており、腫瘍‐免疫相互作用やバリア生物学の観点から研究対象として注目されている。

Nectin 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NECTIN2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nectin 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NECTIN2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNECTIN2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nectin 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNECTIN2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNectin 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNECTIN2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNectin 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。