Plásmido CRISPR de Activación (h) NDUFV2: sc-403777-ACT

NDUFV2 codifica una subunidad central del complejo I mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorreductasa) en la membrana mitocondrial interna, donde contribuye a la transferencia de electrones desde el NADH hacia la cadena respiratoria. A través de su papel en la fosforilación oxidativa, NDUFV2 favorece la producción de ATP, el equilibrio redox mitocondrial y la regulación de las especies reactivas de oxígeno, que influyen en la señalización frente al estrés y la adaptación metabólica. La alteración de componentes del complejo I, incluido NDUFV2, se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial y con estados bioenergéticos modificados relevantes para la neurodegeneración, el estrés cardiometabólico y otros trastornos vinculados a un transporte de electrones deficiente. Por ello, NDUFV2 se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para estudiar la respiración mitocondrial, el metabolismo del NADH y la señalización celular impulsada por las mitocondrias.

NDUFV2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NDUFV2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NDUFV2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NDUFV2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NDUFV2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NDUFV2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NDUFV2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NDUFV2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NDUFV2 en células tumorales con expresión de NDUFV2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.