NDUFB5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-410902-NIC

NDUFB5は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）の補助サブユニットをコードしており、複合体の適切な組み立てと、NADHからユビキノンへの電子伝達に寄与します。酸化的リン酸化における役割を通じて、NDUFB5はミトコンドリア膜電位の維持、ATP産生、細胞内のレドックスバランスに影響し、その下流で活性酸素種（ROS）の恒常性にも作用します。複合体I機能の変化は、ミトコンドリアの生体エネルギー的ストレス、代謝の再プログラム化、高エネルギー需要組織における脆弱性と関連しており、NDUFB5はミトコンドリア機能障害を研究する上で重要な結節点となります。NDUFB5に関する研究は、ミトコンドリアのプロテオスタシス、マイトファジー、呼吸障害に応答する核—ミトコンドリア間シグナル伝達の経路と交差することが一般的です。

NDUFB5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NDUFB5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NDUFB5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NDUFB5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NDUFB5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。