Ndfip2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405125-ACT

NDFIP2 (Ndfip2) codifica um adaptador de membrana endossomal que se liga e ativa ligases E3 de ubiquitina do tipo HECT da família NEDD4, ajudando a direcionar cargas ubiquitinadas através da endocitose e da degradação associada a lisossomos. Por meio dessas interações, Ndfip2 contribui para a regulação dependente de ubiquitina da abundância de proteínas de membrana, do tráfego vesicular e de saídas de sinalização ligadas a respostas celulares ao estresse. A expressão de NDFIP2 tem sido estudada em contextos imunes e epiteliais, nos quais o controle mediado por ubiquitina da dinâmica de receptores e transportadores pode moldar programas de inflamação, sobrevivência e diferenciação. A desregulação do tráfego endolisossomal e das redes de ligases de ubiquitina é amplamente relevante para a biologia do câncer e para mecanismos neuroimunes, sustentando o NDFIP2 como um nó útil para estudos focados em vias.

Ndfip2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDFIP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ndfip2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDFIP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDFIP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ndfip2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDFIP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ndfip2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ndfip2 em células tumorais com expressão de NDFIP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.