Ndfip1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403470-ACT

NDFIP1（Ndfip1）は、NEDD4ファミリーのHECT型E3ユビキチンリガーゼと相互作用し、膜タンパク質のユビキチン化、輸送、分解（ターンオーバー）を連結するエンドソームアダプタータンパク質をコードします。ユビキチン依存的なソーティングの制御を介して、Ndfip1は受容体シグナル伝達の強度、エンドソーム動態、ならびに免疫応答やストレス応答性の細胞状態を形作るプロテオスタシス経路の制御に寄与します。NDFIP1活性の変化は、炎症性シグナルの異常や免疫恒常性の破綻に関与すると示唆されており、シグナル適応の機構解析やユビキチン介在経路制御の研究において重要です。ヒト細胞モデルでは、NDFIP1発現の調節を通じて、E3リガーゼの標的化が下流の転写プログラムや免疫調節に関連する細胞表現型に与える影響を検証するために用いられます。

Ndfip1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDFIP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ndfip1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDFIP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDFIP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ndfip1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDFIP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNdfip1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDFIP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNdfip1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。