NCAM/CD56 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400302-ACT

NCAM1 codifica a molécula de adesão celular neural (NCAM/CD56), uma glicoproteína da superfamília das imunoglobulinas que medeia interações célula–célula homofílicas e heterofílicas e regula a sinalização dependente de adesão. A NCAM/CD56 contribui para o crescimento de neuritos, a plasticidade sináptica, a migração e a remodelação do citoesqueleto por meio de vias que envolvem Fyn/FAK, MAPK/ERK e GTPases da família Rho, além de modular a organização da superfície celular via polissialilação. No sistema imune, a NCAM/CD56 é um marcador definidor de células natural killer e está ligada à formação da sinapse imune e à função efetora. A expressão ou a glicosilação desregulada de NCAM1 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos e é frequentemente estudada na biologia do câncer, em que programas alterados de adesão e invasão estão implicados.

NCAM/CD56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCAM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NCAM/CD56 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCAM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NCAM/CD56. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCAM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NCAM/CD56 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NCAM/CD56 em células tumorais com expressão de NCAM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.