NBR1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421827-NIC

マウス Nbr1 は、選択的オートファジー受容体である NBR1 をコードしている。NBR1 は UBA ドメインを介してユビキチン化されたカーゴを認識し、LIR モチーフによって LC3/GABARAP タンパク質と結合することで、オートファゴソームへの標的化を促進する。NBR1 はアグリファジーにおいて p62/SQSTM1 と協調して機能し、プロテオスタシス、オルガネラの品質管理、ならびに細胞生存や炎症性シグナル伝達を規定するストレス応答に寄与する。ユビキチン依存的な輸送やオートファジー‐リソソーム経路との相互作用を通じて、NBR1 はタンパク質凝集体や損傷した細胞内成分の分解・更新に影響を及ぼす。これらの過程の破綻は、オートファジー・フラックスの低下や異常なユビキチンシグナルが共通してみられる神経変性、代謝ストレス、腫瘍生物学に関する研究において重要である。

NBR1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nbr1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nbr1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nbr1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nbr1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。