Nanog CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418033-ACT

ヒトNANOGは、ホメオボックス型転写因子Nanogをコードしており、胚性幹細胞の自己複製を維持し、系譜決定（分化系列へのコミットメント）を抑制する多能性の中核制御因子です。NanogはOCT4およびSOX2とともに多能性コアネットワークの中で機能し、分化、エピジェネティックなリモデリング、細胞運命決定に影響する転写プログラムとクロマチン状態を協調的に調節します。NANOG発現の異常は、幹細胞様表現型、発生シグナル伝達の変化、転写リプログラミングと関連しており、がん生物学の文脈（腫瘍細胞の可塑性や薬剤抵抗性に関連する状態が研究される場面）を含む多様な疾患モデルで観察されています。核内のDNA結合因子として、Nanogは発生および細胞同一性を支える転写回路を解析する上で、扱いやすい標的（ノード）となります。

Nanog CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NANOGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nanog CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NANOG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNANOG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nanogの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNANOG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNanog依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNANOG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNanog経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。