NALP1A CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431476-ACT

マウスNlrp1aは、細胞質に存在するNOD様受容体であるNALP1Aをコードしており、病原体関連シグナルや危険関連シグナルを自然免疫の活性化へと結び付けるインフラマソームのセンサーとして機能します。活性化されるとNALP1Aはインフラマソーム複合体の形成を促進し、カスパーゼ1の活性化を引き起こします。その結果、IL-1ファミリーサイトカインのプロセシング（成熟化）や、パイロトーシスなどの炎症性細胞死プログラムが誘導されます。この経路はNF-κBによるプライミング、細胞ストレス応答、抗菌防御とも交差し、骨髄系細胞および上皮細胞の免疫シグナル伝達を形作ります。NLRP1ファミリーのインフラマソーム活性が制御不全に陥ると、異常な炎症表現型や免疫介在性の組織障害に関与することが示唆されており、Nlrp1aはマウスモデルにおける無菌性炎症や宿主—病原体相互作用の機序解析において重要な研究対象となります。

NALP1A CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Nlrp1aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NALP1A CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Nlrp1a 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNlrp1a転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NALP1Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNlrp1a遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNALP1A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNlrp1a発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNALP1A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。