Plasmide CRISPR d'Activation (h) NAIF1: sc-410516-ACT

NAIF1 (nuclear apoptosis-inducing factor 1) est une protéine nucléaire humaine impliquée dans la régulation de la mort cellulaire programmée et le contrôle de la prolifération. Les fonctions décrites associent NAIF1 à des processus liés à la chromatine et à des programmes transcriptionnels qui influencent la signalisation apoptotique, l’inscrivant au sein de réseaux plus larges de réponse au stress qui modulent les décisions de destin cellulaire. L’expression altérée de régulateurs de l’apoptose tels que NAIF1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, où des changements de survie cellulaire, de réponse aux dommages de l’ADN et de contrôle de la croissance contribuent à des phénotypes associés à la maladie. NAIF1 constitue donc un nœud utile pour disséquer les mécanismes nucléaires qui couplent la régulation génique à l’apoptose et à des issues liées au cycle cellulaire.

NAIF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NAIF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NAIF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NAIF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NAIF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NAIF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NAIF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NAIF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NAIF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NAIF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.