NAGAT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401118-ACT

ABOは、一般にN-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（NAGAT）と呼ばれるA/Bグリコシルトランスフェラーゼ活性をコードしている。NAGATはゴルジ体に局在する酵素で、H抗原の末端糖鎖を修飾してAおよびB血液型決定基を生成する。糖鎖複合体の生合成を制御することで、ABOは細胞表面の糖鎖修飾パターンに影響を与え、膜タンパク質の輸送、細胞間認識、ならびにレクチンや免疫メディエーターとの相互作用を左右する。ABO依存的な糖鎖構造の違いは、フォン・ヴィレブランド因子などの糖タンパク質やその他の血漿タンパク質への影響を介して、止血および炎症の表現型変化と関連づけられている。これらの特性により、ABO/NAGATは、ヒト細胞における血管生物学、宿主—病原体相互作用、免疫制御に関わる糖鎖修飾依存的メカニズムを研究するための有用なモデルとなる。

NAGAT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ABOの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NAGAT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ABO 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はABO転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NAGATの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のABO遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNAGAT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびABO発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNAGAT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。