NaDC-3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431118-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NaDC-3 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NaDC-3ダブルニカースプラスミド（m）およびNaDC-3ダブルニカースプラスミド（m2）は、Slc13a3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NaDC-3 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-431118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NaDC-3 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-431118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc13a3は、ナトリウム依存性ジカルボキシラート輸送体NaDC-3（SLC13A3）をコードする。NaDC-3は細胞膜に局在する共輸送体で、Na⁺勾配を利用して、コハク酸、α-ケトグルタル酸、クエン酸などのジカルボン酸／トリカルボン酸を細胞内へ取り込む。NaDC-3は、TCA回路中間体や関連する有機アニオンの細胞内利用可能量を調節することで、中間代謝、レドックスバランス、アナプレロティック・フラックスに影響を与え、その下流で代謝シグナル伝達経路にも作用する。輸送需要の高いマウス組織では、NaDC-3は有機アニオンの取り扱いと代謝物恒常性の維持に寄与し、これらは代謝生理および腎生理と関連する。ジカルボキシラート輸送の破綻やコハク酸／α-ケトグルタル酸の取り扱いの変化は、低酸素応答や炎症性シグナルに影響し得るため、Slc13a3は代謝リプログラミングや輸送体関連疾患機序を研究する上で有用な標的となる。
NaDC-3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Slc13a3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Slc13a3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Slc13a3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Slc13a3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。