N4BP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-412585-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- N4BP2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- N4BP2ダブルニカースプラスミド（h）およびN4BP2ダブルニカースプラスミド（h2）は、N4BP2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
N4BP2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-412585-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
N4BP2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-412585-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
N4BP2（NEDD4結合タンパク質2）は、NEDD4ファミリーのE3リガーゼとの相互作用を介してユビキチン関連シグナル伝達に関与するとされる、大型の細胞内タンパク質をコードしています。このことから、タンパク質の分解・代謝回転や細胞内輸送（トラフィッキング）の制御に役割を担う可能性が示唆されています。近年の知見により、N4BP2はNF-κB関連シグナルの調節や細胞の活性化状態の制御など、免疫・炎症応答を形作る経路とも関連することが示されつつあります。N4BP2の発現異常や遺伝子破綻は、血液腫瘍および固形腫瘍の生物学的文脈でも検討されており、ユビキチン依存的なシグナル制御とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の維持が、増殖、ストレス応答、ゲノム維持に影響し得ます。こうした背景から、N4BP2はヒト細胞におけるユビキチン回路の作動機構や、その下流の転写プログラムを解析するための有用な標的です。
N4BP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における N4BP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、N4BP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、N4BP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、N4BP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。