N-Shc Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401571-ACT

SHC3 codifica a proteína adaptadora neuronal N-Shc, um membro da família Shc que acopla receptores tirosina-quinase ativados a cascatas de sinalização intracelular. A N-Shc participa da sinalização de neurotrofinas e fatores de crescimento ao conectar receptores como Trk e EGFR às vias a jusante Ras/MAPK e PI3K/AKT, modulando a diferenciação neuronal, a sobrevivência e a plasticidade sináptica. Por meio dos seus domínios PTB e SH2, a N-Shc integra interações dependentes de fosforilação que influenciam a dinâmica do citoesqueleto e o crescimento de neuritos. Alterações na sinalização de SHC3 têm sido associadas a programas de sinalização neural desregulados, estudados em modelos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, bem como a reconfiguração de vias oncogênicas em contextos específicos.

N-Shc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SHC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

N-Shc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SHC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SHC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de N-Shc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SHC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de N-Shc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via N-Shc em células tumorais com expressão de SHC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.