Myosin VIIB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409183-ACT

ヒトのMYO7Bは、アクチンを基盤とするモータータンパク質であるミオシンVIIBをコードしており、細胞骨格の構築や、細胞極性および特化した膜ドメインの維持に関連する細胞内輸送過程を支えます。非従来型ミオシンファミリーの一員として、上皮の構造形成に関与するアクチンフィラメント動態、小胞輸送、ならびに足場化されたシグナル伝達イベントに関与すると考えられています。アクチン依存的な輸送や極性経路の破綻は、バリア機能不全や組織構築の変化といった文脈でしばしば研究されており、消化管系や感覚系に関連する現象として注目されています。そのためMYO7Bの調節は、アクチンモーターがヒト細胞において輸送、接着複合体、そして接合部のリモデリングをどのように協調させるかを解明するうえで有用です。

Myosin VIIB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYO7Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myosin VIIB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYO7B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYO7B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Myosin VIIBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYO7B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyosin VIIB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYO7B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyosin VIIB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。