Myosin Vb Double Nickaseプラスミド (h): sc-403324-NIC

MYO5BはミオシンVbをコードしており、ミオシンVbはアクチンに依存して働くモータータンパク質で、Rab GTPaseやリサイクリングエンドソームのカーゴとの相互作用を介して、小胞輸送および極性化した膜への送達を協調的に制御します。ミオシンVbはアピカル側リサイクリング、上皮の極性、トランスサイトーシスを調節し、その結果として腸・肝臓・腎臓などの組織におけるタイトジャンクションの構築や膜タンパク質の局在に影響を与えます。MYO5B依存的な輸送が破綻すると、エンドソームでのソーティングやトランスポーター／受容体の細胞表面発現が乱れ、ミオシンVb機能の変化が上皮バリア機能や栄養取り扱いの異常に結び付くことが示されます。これらの過程により、MYO5Bは細胞極性、エンドソーム動態、輸送関連疾患メカニズムの研究でしばしば検討される、細胞骨格輸送および膜リサイクリングの中核経路に位置付けられます。

Myosin Vb ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MYO5B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MYO5B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MYO5Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MYO5Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。