Myosin Vb CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403324-ACT

MYO5Bは、アクチン依存性モータータンパク質であるミオシンVbをコードしており、リサイクリングエンドソームの動態や極性輸送を協調させる細胞内膜輸送の主要な調節因子です。ミオシンVbはRab GTPアーゼと相互作用して小胞の移動とカーゴの送達を制御し、上皮細胞における頂端—基底側極性、タイトジャンクションの維持、受容体のリサイクリングを支えます。MYO5B依存的な輸送が破綻すると、刷子縁の構造や膜タンパク質の局在が乱れ、これは腸管上皮の恒常性にとって中核となる過程です。MYO5Bの機能異常は、微絨毛封入体病（microvillus inclusion disease）をはじめとする先天性腸症や関連する胆汁うっ滞性表現型と強く関連しており、上皮極性やエンドソームソーティングの研究において重要な標的となります。

Myosin Vb CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYO5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myosin Vb CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYO5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYO5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Myosin Vbの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYO5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyosin Vb依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYO5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyosin Vb経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。