Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Myosin Va Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402108
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Myosin Va Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Myosin Va, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Myosin Va Antibody (G-4): sc-365986
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Myosin Va Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402108 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MYO5A codifica la miosina Va, una proteina motoria basata sull’actina che consente il trasporto a lunga distanza di organelli delimitati da membrana e complessi proteici lungo la rete di actina corticale. La miosina Va coopera con le GTPasi Rab e con proteine adattatrici per regolare il traffico vescicolare, il riciclo endocitico, la dinamica dei granuli secretori e la consegna polarizzata dei carichi in neuroni, melanociti e cellule immunitarie. Questi processi contribuiscono alla funzione sinaptica, alla distribuzione dei melanosomi e alla polarizzazione cellulare, collegando l’attività di MYO5A a fenotipi neurologici e di pigmentazione quando viene alterata. Nei modelli cellulari umani, un trasporto dipendente dalla miosina Va modificato può influenzare la segnalazione compartimentalizzata e l’organizzazione del citoscheletro, aspetti rilevanti per disfunzioni cellulari associate a malattie.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Va (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MYO5A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MYO5A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MYO5A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myosin Va.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MYO5A per lo studio della segnalazione di Myosin Va, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MYO5A critici per la funzione di Myosin Va
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MYO5A per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Myosin Va CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Myosin Va CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MYO5A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Myosin Va Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Myosin Va (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MYO5A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MYO5A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.