Myosin Id CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403425-ACT

ヒトMYO1DはミオシンIdをコードしており、皮質アクチン細胞骨格と細胞内膜系とを結び付ける役割に関与すると考えられる、アクチン依存性の膜結合型モータータンパク質です。ミオシンIdは、膜輸送、エンドサイトーシス後のリサイクリング、細胞極性や形態の組織化などの過程を支え、細胞膜におけるシグナル伝達の空間的制御と細胞骨格リモデリングを連結します。これらの機能を通じて、MYO1Dは、方向性のある小胞輸送や細胞骨格依存的な受容体分布に依存する経路に影響を及ぼし得ます。アクチン—膜動態および極性プログラムの破綻は、細胞移動の変化や上皮組織化の異常など、疾患関連の表現型と関連するため、MYO1Dは細胞恒常性における機構解析の標的として有用です。

Myosin Id CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYO1Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myosin Id CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYO1D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYO1D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Myosin Idの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYO1D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyosin Id依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYO1D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyosin Id経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。