MYL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403198-ACT

MYL3 はミオシン軽鎖3をコードしており、横紋筋におけるミオシンIIモーター複合体の制御成分として、アクチン‐ミオシン間のクロスブリッジサイクルおよび収縮力の発生を調節します。ミオシンATPase活性やフィラメント間相互作用を調整することで、MYL3 はサルコメアの構造形成、カルシウム感受性の収縮性、ならびに筋原線維の力学特性に寄与します。MYL3 の発現変化やバリアントは心筋症様の表現型や心筋機能障害と関連づけられており、サルコメア生物学や収縮性関連シグナルの研究に有用なマーカーとなります。したがってヒトMYL3は、筋発生、機械的ストレス応答、そして心筋細胞の構造と機能を規定する経路の解明において重要です。

MYL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。