MYL10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413972-ACT

MYL10 codifica a cadeia leve de miosina 10, um componente regulatório do citoesqueleto de actomiosina que modula a atividade motora da miosina e contribui para a geração de força. Por meio do controle dependente de fosforilação da função da miosina II, o MYL10 participa de processos de remodelamento do citoesqueleto que influenciam a forma celular, a contratilidade, a adesão e a motilidade. Esses mecanismos se interseccionam com vias que regulam a dinâmica de actina e a sinalização contrátil dependente de Rho/ROCK, tornando o MYL10 relevante para estudos de organização tecidual e de comportamentos celulares regulados mecanicamente. A alteração da regulação da contratilidade do citoesqueleto é frequentemente associada à migração aberrante e a fenótipos invasivos, sustentando a investigação do MYL10 em modelos relevantes de doença nos quais a tensão de actomiosina está desregulada.

MYL10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYL10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYL10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYL10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYL10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYL10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYL10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYL10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYL10 em células tumorais com expressão de MYL10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.