MYH9 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437291-ACT

MYH9は、ラット細胞において細胞収縮性、細胞質分裂、ならびに細胞皮質（コルチカル）細胞骨格の動的な再編成を駆動する、アクチン依存性モータータンパク質である非筋ミオシンIIAをコードします。アクトミオシン張力の制御を通じて、MYH9はフォーカルアドヒージョンのターンオーバー、細胞極性、そして細胞移動や組織構築を協調させるメカノトランスダクション経路に影響を与えます。MYH9の機能は、膜輸送、貪食様プロセス、上皮・内皮バリアの維持を制御するRhoA/ROCKシグナル伝達や、インテグリン連結型の細胞骨格ネットワークとも交差します。MYH9活性の変化は、血小板産生と止血の異常、腎・聴覚の表現型、さらに炎症、線維化、がん細胞浸潤モデルの研究に関連するより広範な細胞骨格制御の破綻と関連づけられています。

MYH9 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH9 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。