MYH9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401182-ACT

MYH9 codifica a miosina IIA não muscular, uma proteína motora dependente de actina que converte a hidrólise de ATP em força mecânica para regular a organização do citoesqueleto, a adesão celular, a polaridade e a contratilidade. Por meio de suas funções na dinâmica actomiosina, MYH9 influencia processos como migração celular, citocinese e mecanotransdução, integrando-se a vias que coordenam a sinalização por GTPases Rho e o remodelamento de adesões focais. Alterações na função de MYH9 estão associadas a distúrbios relacionados a MYH9, caracterizados por macrotrombocitopenia e disfunção plaquetária, e também têm sido estudadas em contextos de integridade epitelial e comportamento celular invasivo. Essas conexões biológicas tornam MYH9 um alvo útil para dissecar o controle citoesquelético da arquitetura celular e a sinalização responsiva ao estresse.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH9 em células tumorais com expressão de MYH9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.