MYH8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400346-ACT

MYH8は、横紋筋における太いフィラメント形成に寄与し、アクチン依存的な収縮力を生み出すサルコメア構成要素のモータータンパク質であるミオシン重鎖8をコードします。ミオシンII複合体の一部として、MYH8はATP依存的な力発生を支え、筋原線維の構築、筋線維の成熟、ならびに細胞骨格ダイナミクスに影響を与えます。MYH8の発現は発生段階に応じて制御され、特殊化した、あるいは発達途上の骨格筋の状況で高発現することが多いため、筋形成（ミオジェネシス）や筋可塑性の研究において重要です。ミオシンモーター機能に影響する制御異常やバリアントは、先天性ミオパチーや遠位型関節拘縮（distal arthrogryposis）関連の表現型と関連づけられており、MYH8が神経筋疾患のメカニズムに関与することを示しています。

MYH8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。