MYH7B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400621-ACT

MYH7Bは、サルコメア型ミオシン重鎖ファミリーに属するタンパク質をコードしており、アクチン依存性のモーター活性や、横紋筋系統における収縮装置の構築・配列に関与します。ミオシン依存的な力発生の一環として、MYH7Bは細胞骨格ダイナミクス、ATP依存的な力学—化学変換、ならびに筋原線維の完全性維持や筋細胞分化を支える経路と機能的に関連しています。ミオシン重鎖遺伝子プログラムの破綻（調節異常）は、心筋細胞および骨格筋のリモデリングの文脈で広く研究されており、収縮関連遺伝子発現の変化が病的表現型に寄与します。そのためMYH7Bは、ヒト細胞モデルにおいてサルコメア構成要素の転写制御、筋特異的遺伝子ネットワーク、ならびにストレス応答性リモデリング過程を検討するための有用な標的となります。

MYH7B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH7Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH7B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH7B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH7B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH7Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH7B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH7B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH7B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH7B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。