MYH6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400351-ACT

MYH6は心筋αミオシン重鎖をコードしており、ATP依存的なアクチン–ミオシンのクロスブリッジサイクリングによってサルコメア短縮を駆動する、ミオシンII太いフィラメントの中核構成要素である。ヒト心筋においてMYH6は、制御タンパク質および構造タンパク質を含むサルコメア関連タンパク質との相互作用を通じて、収縮の速度特性、発生張力、ならびに協調的な興奮–収縮連関に寄与する。MYH6の発現量とアイソフォームのバランスは、発生過程および血行動態ストレスへの応答において厳密に制御されており、筋原線維形成や心臓リモデリングを司る経路との関連が示唆される。MYH6の遺伝的変異や制御異常は、遺伝性心筋症や先天性心疾患表現型と関連づけられており、心機能の機序研究で頻繁に解析対象となっている。

MYH6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。