MYH10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401835-ACT

MYH10 codifica a miosina IIB não muscular, uma proteína motora baseada em actina que impulsiona a geração de força contrátil e regula a organização do citoesqueleto, a adesão celular e a migração direcional. Por meio de seu papel em redes actomiosina, o MYH10 sustenta a citocinese, a morfogênese tecidual e a mecanotransdução, interagindo com vias que controlam a sinalização de Rho GTPases, a dinâmica de adesões focais e a tensão cortical. Alterações na expressão de MYH10 ou na função da miosina II têm sido associadas à desregulação da motilidade celular e de processos do desenvolvimento, tornando-o relevante para estudos de remodelação epitelial, neurodesenvolvimento e fenótipos celulares associados à fibrose. Como componente central do citoesqueleto, o MYH10 é frequentemente investigado em modelos que avaliam mudanças na forma celular, função de barreira e sinalização dependente de força.

MYH10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH10 em células tumorais com expressão de MYH10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.