Myf-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401899-ACT

MYF6は、Myf-6（MRF4としても知られる）をコードしており、これは塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写因子です。Myf-6は、骨格筋系譜へのコミットメントと終末分化を制御する筋形成制御因子（myogenic regulatory factor）ネットワークの中で機能します。Myf-6は、E-box調節配列との相互作用や他の筋形成因子との協調的なクロストークを介して、筋原線維の組み立て、筋線維の成熟、筋としてのアイデンティティ維持に関わる転写プログラムを統合・調整します。その活性は、発生シグナル下流の転写回路や筋特異的遺伝子発現のエピジェネティックな制御を含む、筋形成および筋リモデリングを司る経路とも連動しています。MYF6が関与する筋形成転写制御の破綻は、神経筋発生、筋の変性・再生ダイナミクス、ならびに横紋筋肉腫のような異常な筋形成分化プログラムを示す腫瘍の研究において重要です。

Myf-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYF6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Myf-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYF6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYF6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Myf-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYF6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyf-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYF6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyf-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。